分享Journal of Proteome Research上的一篇文章。本文通讯作者是来自于约翰霍普金斯大学医学院的Akhilesh Pandey教授，Pandey lab是一个系统生物学实验室，他们运用包括分子生物学、分析化学、计算生物学与各种“组学”的技术，包括基因组学和蛋白质组学来理解和识别信号通路，来验证在多种癌症中的治疗靶点和生物标志物等。

       生物素化修饰蛋白质的鉴定迄今为止一直依赖于利用生物素和streptavidin之间强有力的亲和作用，在与streptavidin结合之后被on-beads酶切或者胶内酶切，然后通过LC - MS / MS分析。虽然这些方法已成功地应用，但是酶切下来鉴定到的 都nonbiotinylated肽段，而真正被生物素化修饰的位点肽段是很难洗脱下来，因为链霉亲和素对生物素有很强的亲和力。

       目前已经开发的几种洗脱方法有：使用表面活性剂、用极低的pH环境或者改变溶剂，以及用化学或遗传学手段减弱链霉亲和素与生物素的亲和性。然而，这些方法的效率都不高，许多生物素化肽段仍然强有力结合于beads上，被鉴定到的生物素修饰肽段仍然很少，nonbiotinylated肽总是大大超过生物素修饰肽。前人研究中，有人开发方法为先酶切后再用NeutrAvidin去富集肽段，不过这种方法主要是用在体外生物素化的蛋白上，在体内效率还是很低。

       为了提高生物素修饰肽的检测效率，本文作者已经开发出一种生物素化修饰位点鉴定策略Biotinylation Site Identification Technology (BioSITe)，这是基于生物素抗体直接捕获和识别标记肽的方法。该方法即首先对蛋白进行酶切拿到肽段，然后再用抗生物素的抗体来捕获其中被生物素化修饰的肽段，与此同时抗体是结合在beads上的，此时将抗出来的肽段洗脱下来通过LC−MS / MS鉴定。这个方法还可以用在proximity-dependent biotinylation 方法中。同时作者还用这个BioSITe 对O-GlcNAc修饰位点进行鉴定，来证明该方法的高效。

      本文开发的生物素修饰位点鉴定策略的亮点就是采用了生物素抗体与beads结合，使得被修饰的肽段在富集出来之后很容易的被洗脱下来从而进行检测。

文章链接：http://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jproteome.7b00775

文章引用：DOI: 10.1021/acs.jproteome.7b00775